TÉCNICA ELISA

El método ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. 

Al estar uno de los componentes (Ag o Ac) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte o pocillo (inmunoadsorbente) la reacción Ag-Ac quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar, la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

• ANTÍGENO (Ag):​

Molécula exógena, que se encuentra ​

en la superficie de un agente patógeno, ​

y que al entrar en contacto con el ​

organismo, induce la producción de una ​

respuesta del Sistema Inmune específica ​

(formación de Acs)​

​

• ANTICUERPO (Ac):​

Proteína producida como respuesta a una sustancia “extraña” (Ag) y que tiene la capacidad de combinarse con él (complejo Ag-Ac).

¿Qué es un INMUNOENSAYO?

Analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio. ​

En el inmunoensayo, el analito puede ser tanto un Ac como un Ag.

• Es una prueba que usan complejos antígeno:anticuerpo (también denominados inmunocomplejos) para medir la presencia de un analito específico en una muestra. ​

     “Inmuno” se refiere a una respuesta inmunológica que hace que el cuerpo genere anticuerpos, y “ensayo” se refiere a una prueba. Entonces, un inmunoensayo es una prueba que  utiliza inmunocomplejos cuando hay una unión Ag-Ac.​

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• Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio (como las pruebas colorimétricas) ya que usan complejos Ac-Ag para generar una señal que pueda medirse.​

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• Los Acs son la base de los inmunoensayos, ya que poseen una alta especificada y afinidad para un Ag específico. Es esta unión lo que permite la detección de analitos por medio de una variedad de técnicas de inmunoensayo.

TIPOS:

• ELISA no competitivo:​

Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo Ag-Ac, y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato desarrollando color.​

• Directo:  Detectan Ag​
• Indirecto:  Detectan Ac​
• ELISA Sandwich​
• Doble (DAS)​
• Heterólogo (HADAS)​

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• ELISA competitivo:​

El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra. 

ELISA directo

Consta de las siguientes etapas: ​

Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Acs específicos. ​

Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados. ​

Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.​ Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado

ELISA indirecto

Consta de las siguientes etapas: ​

Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos. ​

Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados. 

​Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado. ​

​Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado.

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