El test de la vida: noviembre 2014

CONTENIDO

Introducción: Asignatura "Análisis químico instrumental"

Bioseguridad: referente normativo, generalidades, exposición de riesgo biológico, físico y químico

Toma de muestra venosa capilar y arterial

Espectrofotometría

Espectrofotometría: enzimática, enzimática U.V. y colorimétrica

Cromatografía

Electroforesis

Nefelometría y Turbidimetría

ELISA

Disoluciones

Características de la Luz

La luz viaja en línea recta, al camino que recorre la luz se le llama trayectoria.

Existen cuerpos que no dejan pasar la luz y forman una sombra definida, a estos cuerpos se les conoce como opacos. Otros dejan pasar parcialmente la luz y producen una sombra muy tenue, se les llama traslúcidos; y los que dejan pasar la luz casi totalmente se llaman transparentes.

Los cuerpos opacos proyectan una sombra más definida, llamada umbra. La palabra umbra señala la parte más oscura de una sombra. En la umbra la fuente de luz es completamente bloqueada por el objeto que causa la sombra.

Los cuerpos traslúcidos proyectan una sombra parcial conocida como penumbra y se da porque la fuente de luz es bloqueada parcialmente por el objeto. La palabra penumbra significa casi sombra.

La luz tiene una naturaleza dual:

Como onda
Como una corriente de partículas o paquetes de energía que es conocida como fotones.

Albert Einstein desarrolló en 1905 la teoría de que la luz estaba compuesta de unas partículas denominadas fotones, cuya energía era inversamente proporcional a la longitud de

onda de la luz.

La teoría electromagnética de la luz propuesta por Maxwell: La perturbación que se propaga como ondas de luz está formada por fuerzas eléctricas y magnéticas, y la perturbación se produce en cargas eléctricas en movimiento.

COLORES

se deben a la mezcla de luces de diferentes longitudes de onda.

Se conoce como color puro al color de la luz con una única longitud de onda o una banda estrecha de ellas.

TONALIDAD Es el atributo que nos permite identificar los colores como rojos, azules, amarillos, etc. También se suelen emplear los términos croma o tinta. Gradaciones de tono entre dos primarios.
LUMINOSIDAD Se refiere al grado de oscuridad o claridad de una color. También se suele emplear el término de valor o brillo.
SATURACIÓN Se refiere al grado de pureza de un color respecto del gris. También se suele emplear el término de intesidad.

Cuanto más larga la longitud de onda de la luz visible tanto más rojo el color.

Asimismo las longitudes de onda corta están en la zona violeta del espectro.

LONGITUD DE ONDA

Longitud de onda. La distancia existente entre dos crestas o valles consecutivos es lo que llamamos longitud de onda (λ = lambda).. La longitud de onda de una onda describe cuán larga es la onda. Las ondas de agua en el océano, las ondas de aire, y las ondas de radiación electromagnética tienen longitudes de ondas. La longitud de onda representa la distancia real recorrida por una onda que no siempre coincide con la distancia del medio o de las partículas en que se propaga la onda.

CARACTERÍSTICAS DE LAS ONDAS

TÉCNICA ELISA

El método ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática.

Al estar uno de los componentes (Ag o Ac) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte o pocillo (inmunoadsorbente) la reacción Ag-Ac quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar, la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

ANTÍGENO (Ag):

Molécula exógena, que se encuentra

en la superficie de un agente patógeno,

y que al entrar en contacto con el

organismo, induce la producción de una

respuesta del Sistema Inmune específica

(formación de Acs)

ANTICUERPO (Ac):

Proteína producida como respuesta a una sustancia “extraña” (Ag) y que tiene la capacidad de combinarse con él (complejo Ag-Ac).

¿Qué es un INMUNOENSAYO?

Analito es todo lo que se mide en una prueba de laboratorio.

En el inmunoensayo, el analito puede ser tanto un Ac como un Ag.

Es una prueba que usan complejos antígeno:anticuerpo (también denominados inmunocomplejos) para medir la presencia de un analito específico en una muestra.

“Inmuno” se refiere a una respuesta inmunológica que hace que el cuerpo genere anticuerpos, y “ensayo” se refiere a una prueba. Entonces, un inmunoensayo es una prueba que utiliza inmunocomplejos cuando hay una unión Ag-Ac.

Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorio (como las pruebas colorimétricas) ya que usan complejos Ac-Ag para generar una señal que pueda medirse.

Los Acs son la base de los inmunoensayos, ya que poseen una alta especificada y afinidad para un Ag específico. Es esta unión lo que permite la detección de analitos por medio de una variedad de técnicas de inmunoensayo.

TIPOS:

ELISA no competitivo:

Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo Ag-Ac, y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato desarrollando color.

Directo: Detectan Ag
Indirecto: Detectan Ac
ELISA Sandwich
Doble (DAS)
Heterólogo (HADAS)

ELISA competitivo:

El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra.

ELISA directo

Consta de las siguientes etapas:

Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Acs específicos.

Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados.

Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado

ELISA indirecto

Consta de las siguientes etapas:

Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos.

Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados.

Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.

Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado.

Descargar diapositivas de ELISA click en la imagen.

ESPECTROFOTOMETRO

Un espectrofotómetro es un instrumento que descompone un haz de luz (haz de radiación electromagnético), separándolo en bandas de longitudes de onda específicas, formando un espectro atravesado por numerosas líneas oscuras y claras, semejante a un código de barras del objeto, con el propósito de identificar, calificar y cuantificar su energía.

COMPONENTES DEL ESPECTROFOTOMETRO